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產品詳情
操作說明
注意事項
產品信息
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產品名稱 |
產品編號 |
規格 |
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支原體檢測試劑盒（化學發光法） |
FKU018 |
20T |
產品簡介
本支原體檢測試劑盒是利用支原體中特有酶的活性設計而成，該酶可將支原體檢測試劑中特有的底物分解同時將ADP轉換成ATP，螢光素酶在ATP存在下催化螢光素氧化發出生物螢光，可通過化學發光儀(luminometer)進行測定，以反應待檢樣品是否存在支原體污染。整個檢測過程操作簡單，只需兩個步驟，耗時約15 min。該方法靈敏度高，檢測的是真正具有生物活性的支原體，所以檢測結果比PCR方法更準確。
儲存與運輸
冰袋（wet ice）運輸；-20℃保存，支原體檢測試劑A需避光保存；有效期12個月。
組成
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Component Number |
Component |
G1901-20T |
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G1901-1 |
支原體檢測試劑A |
1 mL |
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G1901-2 |
支原體檢測試劑B |
1 mL |
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說明書 |
1份 | |
操作步驟
1. 取適量（1 mL足夠）培養3-6天的細胞上清，400 g離心3 min，以去除沉淀少量漂浮細胞或碎片，取上清立即檢測，或者4℃保存在一周內檢測，或者-80℃保存半年內檢測；
2. 將所有檢測試劑和檢測樣品均平衡至室溫，最適宜的溫度為20-25℃；
3. 在96孔檢測板（非透明板，建議用專用96孔白板）中加入50 μL待檢測樣品、陰性對照（如無菌水或PBS）；
4. 加入50 μL支原體檢測試劑A，輕柔混勻不要產生氣泡，室溫（20-25℃）避光放置5 min。然后用具有檢測化學發光的酶標儀進行化學發光檢測，計讀數為A。（請根據儀器靈敏度適當調整相應的參數，每個孔的檢測時間一般為0.25-1 s）；
5. 加入50 μL的支原體檢測試劑B，輕柔混勻不要產生氣泡，室溫（20-25℃）避光放置10 min。然后用具有檢測化學發光的酶標儀進行化學發光檢測，計讀數為B。（注：請嚴格按照加入支原體檢測試劑B后10 min進行檢測，不應提前或延后，否則會影響結果判斷）；
6. 計算比值(Ratio)=讀值B/讀值A。
A. 如果B/A>1.1，說明細胞培養物中存在支原體污染；
B. 如果B/A<0.9，說明細胞培養物中沒有支原體污染；
C. 如果B/A比值在0.9-1.1之間，建議繼續培養細胞24-48 h后，再次檢測確定是否存在支原體污染。如果B/A比值仍在0.9-1.1之間，則該細胞培養物沒有支原體污染，為支原體陰性。
注意事項
1. 支原體檢測試劑A中含有螢光素酶，反復凍融會逐漸使其失活，建議第一次解凍后應適當分裝保存，分裝容器需潔凈無污染。
2. 檢測時強烈建議使用白色或者黑色不透光96孔板，使用普通透明96孔板會使得相鄰檢測孔出現干擾。
3. 人體皮膚表面含有豐富的ATP，檢測時請帶好實驗手套、口罩，其他耗材也應潔凈、無污染，防止外源引入ATP污染。
4. 為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。
產品僅供科研用途，不用于臨床診斷！
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