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產(chǎn)品詳情
操作說明
注意事項(xiàng)
產(chǎn)品簡介
本產(chǎn)品Recombinant TEV Protease是在大腸桿菌中重組表達(dá)帶His標(biāo)簽(His-tag)的煙草蝕紋病毒(Tobacco Etch Virus,TEV)半胱氨酸蛋白酶。TEV Protease是一種常用的半胱氨酸蛋白酶，能特異性地識別七肽序列Glu-Asn-Leu-Tyr-Phe-Gln-Gly/Ser(E-N-L-Y-F-Q-G/S)，并在Gln(Q)和Gly/Ser(G/S)氨基酸殘基之間進(jìn)行酶切。Recombinant TEV Protease最適酶切溫度為30℃，在29-34℃范圍均有較高的酶活性，但當(dāng)溫度達(dá)到或高于37℃時，其酶活性會急劇下降。在實(shí)際操作過程中，為盡量保留目的蛋白結(jié)構(gòu)和生物活性，建議在4℃用TEV Protease酶切過夜。Recombinant TEV Protease在pH 6.0-9.0范圍內(nèi)具有活性，而當(dāng)pH小于或等于5時，會失去酶活性。TEV Protease在400 mM咪唑中仍有較高活力，因此對于使用鎳柱純化含有His標(biāo)簽?zāi)康牡鞍祝芍苯訉EV Protease加入含高濃度咪唑的純化的目的蛋白溶液中，在4℃透析去除咪唑同時進(jìn)行酶切，也可以在透析后再用TEV Protease進(jìn)行酶切以去除His標(biāo)簽。經(jīng)過酶切后目的蛋白溶液中帶有His標(biāo)簽的TEV Protease以及切除的His標(biāo)簽，都可以通過與鎳柱結(jié)合而去除。
應(yīng)用：常用于去除融合蛋白中MBP、GST、His或其他標(biāo)簽蛋白。Recombinant TEV Protease本身帶有His標(biāo)簽可以與鎳柱結(jié)合。
來源：煙草蝕紋病毒(Tobacco Etch Virus，TEV)半胱氨酸蛋白酶，大腸桿菌重組表達(dá)，含His標(biāo)簽。
酶活定義：在30℃，pH 8.0條件下，1 h內(nèi)可以將3 μg底物（含有Recombinant TEV Protease酶切位點(diǎn)的蛋白）切割85%以上所需酶量為一個酶活單位。
失活或抑制：常見的絲氨酸蛋白酶抑制劑如PMSF、AEBSF、bestatin、pepstatin等和EDTA不會抑制TEV Protease活性。而靶向半胱氨酸殘基的蛋白酶抑制劑如NEM或IAA等，可以顯著抑制TEV Protease的酶活力。在較高濃度咪唑中TEV Protease仍保持較高酶活性。
純度及濃度：SDS-PAGE檢測純度≥95%，10 U/μL。
Recombinant TEV protease儲存液：50 mM Tris-HCl，250 mM NaCl，1 mM EDTA，5 mM DTT，50% (v/v) Glycerol，pH 8.0。
10×TEV Buffer：500 mM Tris-HCl，500 mM NaCl，5 mM EDTA，10 mM DTT，pH 8.0。
儲存與運(yùn)輸
冰袋（wet ice）運(yùn)輸；-20℃保存，有效期12個月。
操作步驟
1. 蛋白酶切體系推薦：
|
Component |
Volume |
|
10×TEV Buffer |
5 μL |
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目的蛋白 |
30 μg |
|
Recombinant TEV Protease (His-tag) (10 U/μL) |
1 μL |
|
ddH2O |
To 50 μL |
2. 將上述反應(yīng)體系置于30℃反應(yīng)1-4 h。如果目的蛋白在30℃穩(wěn)定性不佳，可考慮將反應(yīng)體系置于4℃過夜酶切（約16 h左右）；
3. 取酶切產(chǎn)物10 μL樣品進(jìn)行SDS-PAGE電泳檢測，可以評估酶切用量和反應(yīng)條件。
注意事項(xiàng)
1. 酶制品使用時應(yīng)放在冰盒內(nèi)或冰浴，使用完畢后應(yīng)立即放置于-20℃保存，建議分裝保存；
2. 為了您的安全和健康，請穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。
酶切應(yīng)用實(shí)例
圖1：Recombinant TEV Protease酶切對照底物蛋白（A+B融合蛋白，其中含有Recombinant TEV Protease酶切位點(diǎn)）效果圖（酶切條件30℃、pH 8.0，分別酶切0 min、10 min、20 min、30 min、1 h、2 h，依次對應(yīng)泳道Lane：1-6，酶切體系中加入底物與酶質(zhì)量比為20：1）。
產(chǎn)品僅供科研用途，不用于臨床診斷！
凡合肥萬物生物科技有限公司銷售的產(chǎn)品均有嚴(yán)格的質(zhì)量保證。如發(fā)現(xiàn)產(chǎn)品存在包裝規(guī)格疑問，請于收貨之日起七日內(nèi)向我公司總部或當(dāng)?shù)剞k事處提出，并請保證該產(chǎn)品，以備本公司進(jìn)行核對檢驗(yàn)。如果發(fā)現(xiàn)有質(zhì)量問題，請于收貨后一月內(nèi)保留產(chǎn)品50%以上的量，以便本公司回收產(chǎn)品進(jìn)行質(zhì)檢，確認(rèn)產(chǎn)品質(zhì)量。如逾期，則視為已經(jīng)對本公司產(chǎn)品進(jìn)行驗(yàn)收。 聲明：如發(fā)生產(chǎn)品索賠事宜，本公司僅在產(chǎn)品價格范圍內(nèi)酌情賠償，恕不接受超出產(chǎn)品價格范圍之賠償。客戶在使用過程中有任何技術(shù)問題可以撥打技術(shù)售后服務(wù)電話我們隨時給予解答。
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